植物微生物學(xué)多光子顯微技術(shù)樣品檢測(cè)顯微鏡
多光子激發(fā)熒光顯微技術(shù)
在多光子激發(fā)熒光顯微技術(shù)中,熒光發(fā)色團(tuán)是被兩個(gè)或更多的比發(fā)
射光波長更長的光子所激發(fā)的。因?yàn)榧ぐl(fā)只發(fā)生在顯微鏡的焦點(diǎn)上,所
以不對(duì)準(zhǔn)焦點(diǎn)的就吸收的很少,因此有更多的激發(fā)光到達(dá)聚焦平面。在
原理上,多光子激發(fā)熒光顯微技術(shù)法有三個(gè)主要優(yōu)點(diǎn):具有很強(qiáng)的穿透
厚樣品的能力;采用紅外光激發(fā)而實(shí)現(xiàn)對(duì)活細(xì)胞光損傷最小化,以及減
少聚焦平面外的光漂白。
多光子顯微技術(shù)在改善深嵌于植物組織中的微生物細(xì)胞的成像方面
具有很大的應(yīng)用潛力。因?yàn)槠渌愋惋@微鏡照明用的紫外光會(huì)引起植
物細(xì)胞受到一定程度的光損傷,所以多光子顯微技術(shù)對(duì)于植物表面上具
有紫外吸收能力的熒光發(fā)色團(tuán)標(biāo)記的細(xì)菌細(xì)胞的顯微成像非常有用。
這為微生態(tài)研究人員提供更多的可用熒光發(fā)色團(tuán),來研究在植物環(huán)境中
細(xì)菌的行為。但是有證據(jù)表明,實(shí)際上聚焦體積內(nèi)的光漂白效應(yīng)比單光
子激發(fā)更嚴(yán)重,特別是對(duì)于薄的樣品)。甚至對(duì)于綠色熒光蛋白(GFP)這
種被認(rèn)為是相對(duì)穩(wěn)定的熒光分子也是如此。但是,更進(jìn)一步限制該技術(shù)
在植物微生物學(xué)中應(yīng)用的事實(shí)也許是,多光子顯微技術(shù)本身的分辨率始
終比單光子顯微鏡技術(shù)(如CLSM)低。盡管如此,多光子顯微技術(shù)大大改
善了植物組織的三維成像效果,但實(shí)際上該技術(shù)僅適用于尺寸較大的微
生物的成像,而不適用于細(xì)菌。據(jù)我們所知,目前多光子顯微技術(shù)主要
應(yīng)用于微生物學(xué)生物膜的研究上66。隨著價(jià)格低廉的多光子顯微
